2023-03-22
行业热点脐带间充质培养基提供商友康生物整理对从事 UCMSC制备工作的相关要求如下:
1.从事UCMSC的技术人员必须进行体检，消除携带细菌、病毒、支原体、衣原体等病原微生物和传染病，避免操作过程中污染细胞的可能性。长期从事这项工作的技术人员应每半年进行一次体检，传染病患者不得参与UCMSC的制备。
2.进入细胞制备实验室的人员必须学习和了解实验室管理要求，遵守实验室操作流程和规范，服从实验室管理人员的监督管理。
3.为避免错误事故，UCMSO制备过程应由三名细胞生物学专业或专业培训技术人员密切配合，在合格的细胞工程实验室实施，其中两名技术人员主要负责超净工作台上的细胞处理操作，另一名技术人员主要负责过程监督和操作人员的技术操作行为，防止技术错误和样品标签书写错误，协助离心机操作，传递所需物品和信息。
4.应合理控制进入实验室的人数。进入细胞制备实验室的操作技术人员必须注意个人卫生，避免长发、长指甲暴露造成细胞污染，严格按照规定佩戴无菌隔离服和手套，严禁将任何与工作无关的日用品（如手机、各种珠宝等）带入干细胞储存，严禁谈论与当时工作无关的话题。
5.按照人流和物流分离的原则，严格执行物流通道和人员进入通道分离的管理制度。脐带组织容器必须经酒精彻底消毒后才能进入UCMSC制备实验室。所有进入实验室的物品必须在传输窗口包装消毒后转入操作室。严禁不合格设备和培养试剂进入实验室造成污染。
6.标准化的设施和设备条件是保证UCMSC制备和质量的基础。建立符合GMP标准的UCMSC生产标准化实验室，配备必要的细胞制备和质量控制基础设备。建立科学、合理、标准化的技术流程和技术操作程序，严格执行是获得标准化的UCMSC产品和保证质量的关键。在UCMSC制备过程中，应建立技术水平的总流程和子流程。干细胞存储应为每个关键技术环节建立相应的技术操作程序，并在实施过程中进行动态监督和管理。
7.实验室和100级超净工作台必须保持清洁，不得放置无关物品（图6-12A），使用前必须进行紫外线消毒30分钟以上。培养液和细胞分离等开放操作只能在100级超净工作台酒精灯前无菌区（图6-12B）进行，并尽量缩短密封容器外暴露细胞的时间。
8.原代培养的关键环节是组织块的制备、贴墙处理和培养体系。组织块的制备过程应简单、快速、尽量切割成1mm3以下，使脐UCMSC从组织中延伸生长。组织块贴墙是脐带间充质干细胞贴墙生长的先决条件。组织块贴墙的培养过程应避免培养液过多导致组织块漂浮而不是贴墙。接种组织块时，只能加入少量培养基或直接将糊状组织直接种植在培养瓶底，待贴墙牢固后再加入培养液。脐带间充质干细胞培养物理环境:渗透压:280~-330mosm/kgHO，温度：37℃，pH7.0~7，2。细胞制备操作应坚持简单、快速、准确的基本原则，严格执行脐带间充质干细胞分离培养操作程序，避免延迟操作，影响细胞活性。
9.必须使用清洁无菌的玻璃吸管和其他设备，通常使用一次性试管、吸管、容器等，严禁在实验室重复使用，严格防止交叉污染。培养瓶的特点也是组织块壁的关键因素。干细胞储存应尽可能使用改性塑料培养瓶，因为这种塑料培养瓶是亲水的，UCMSC具有附着在塑料瓶壁上生长的特点，一次性使用成本较低。
10.严禁在开放式容器上方操作。装有试剂或细胞的容器应避免在开盖状态下直立放置。开盖容器必须倾斜45°使用或放置角落。
11.用于动物实验的细胞必须高度重视加热原的污染，并确保所使用的材料合格有效（如无菌材料、无热原、培养液无菌、有效期内等）。与干细胞直接接触的材料应选择国家批准的临床应用产品，并建立抽样检验制度，达到规定的质量标准后由质量管理部放行使用。未经国家批准的临床应用产品，应当符合国家有关管理要求。临床应用水平的UCMSC要求较高。
12.UCMSC培养系统通常基于DMEM/F12培养基添加血清和生长因子。市场上销售的DMEM/F12培养基有两种:粉末和液体。建议使用生物公司准备的液体培养基，但不同来源的培养基质量可能存在差距，最好固定来源。在培养基中添加血清是一种常见的做法，但要高度重视来源，排除病原体，尤其是病毒性病原体。临床使用细胞最好不要使用胎牛血清，可以用人体血清或血小板生长因子代替，在培养体系中添加bfgf、FGF、SCF等生长因子能促进脐带间充质干细胞的生长，维持其干细胞特性。干细胞储存和使用无血清培养基是未来脐带间充质干细胞体外制备的发展趋势。其特点是消除了使用血清可能带来的风险，但存在的问题是成本高，不利于大规模使用。严禁使用可能导致细胞遗传特性改变成分的条件，严禁使用海绵体脑病疫区的牛血清，尽量避免在干细胞培养过程中使用人或动物源性材料，不使用抗生素，确保干细胞制剂中残留的培养基成分对患者无不良影响。
13.长期以来，体外代际培养的衰老和突变一直是人们关注的问题，也是影响细胞质量的深层次问题。保证脐带间充质干细胞在体外代际培养8次以内的安全性和活性。连续8次代际培养后，个别细胞会发生染色体变异。
14.在脐带间充质干细胞制备的不同阶段，严格执行操作规程和质量控制标准，确保脐带间充质干细胞制剂无病原微生物污染，无内外源毒素污染，确保细胞活力、细胞纯度、均匀性、细胞染色体等细胞结构及其生物特性高度稳定，达到临床应用质量标准。
15.为保证临床治疗的安全性和有效性，UCMSC制备和鉴定操作人员必须如实认真填写细胞制备、鉴定和质量控制信息并签字确认，技术监督员应负责技术操作和细胞质量鉴定签字，干细胞储存确保只有合格的脐带间充质干细胞才能冷冻储存。
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