友康生物灭活型病毒采样管产品经极端温度运送后性能评价

一、 实验目的

验证本公司病毒采样管产品（货号MT-0501）在经历极端运输温度之后，对其使用性能没有显著的影响。

二、 实验方案

模拟运输过程中的极端温度环境，把采样管置于其中一段时间后，再检测采样管对核酸的保存。对照采用正常存放未经冻融或高温存放的采样管产品。

1、 低温结冰模拟：把采样管放置于-80℃低温环境中冻存后再在室温化冻，重复  3次模拟冻融过程。

2、 高温运输模拟：将采样管置于60℃环境中连续放置3个月。

3、 病毒液混合：采用2种不同浓度的病毒液，分别代表高、低两个浓度梯度。病毒液的拷贝数分别为106 copies/mL和104 copies/mL。模拟实际采样过程，将病毒液以1：9的体积比加入至采样液中，病毒液100μL，采样液900μL，并向其中加入100μL的口腔采集液。采用涡旋振荡器充分混合。

4、 分别在0h和48h提取各组核酸，并进行荧光定量PCR检测。

5、 采用友康生物免裂解核酸提取试剂（磁珠法）试剂盒提取各组病毒的核酸，并采用RT-qPCR的方法检测各组的病毒含量。以Ct值大小作为结果评价的依据。

6、 实验组别如下：

三、 主要实验材料

采样液：友康MT-0501灭活型采样液。

病毒稀释液：采用友康生物病毒分离无血清培养基进行梯度稀释。

验证用的病毒：猪流行性腹泻病毒，一种冠状病毒。其结构和基因组大小均与新型冠状病毒相似。

核酸提取试剂：友康免裂解核酸提取试剂（磁珠法）。

四、 实验结果

1、 产品外观

采样管经过低温放置冻上后，再于室温融化，采样液外观与冰冻前没有差异，颜色一致，无沉淀析出。

2、 性能评价结果

a.各实验组的扩增曲线

起峰较早的几组为高浓度组别的扩增曲线，较晚起峰的几组为低浓度组别的扩增曲线。可以看到不同浓度下的各组扩增曲线基本重合。

b.各组Ct值结果统计

 高浓度与低浓度病毒各组Ct值之间无论是在0h还是在48h均无显著差别。 

五、 实验结论

友康生物灭活型病毒采样管产品经过低温反复冻融后及持续长时间的高温存放处理后，都不会影响其对核酸保存的性能。其稳定性完全能够满足灭活型病毒采样管苛刻条件下病毒样本保存与运输的要求。