新手RNA提取需要注意什么？

在进行基因表达量分析或是构建cDNA文库时，需要从组织或者细胞中进行RNA提取，获得纯度高、完整性好的RNA，对后续的实验至关重要。不同组织总RNA提取的实质就是将细胞裂解，释放出RNA，并通过不同方式去除蛋白质、DNA等杂质，最终获得高纯度RNA产物的过程，Trizol法是最为常见也是最经典的提取方法。RNA提取过程中，有哪些是值得注意的？

1、Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。Trizol试剂含有苯酚，具有毒性和刺激性，操作过程中注意做好防护措施，不要滴到皮肤上。2、 RNA提取过程中RNase污染的主要来源是手、唾沫和空气中的浮沉，注重配带手套和口罩，样品尽可能盖严。3、细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低RNA的得率，因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质（结缔组织和骨除外）。4、在清洗和裂解细胞时最好在低温下操作，防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。5、RNA提取过程中所使用的塑料制品、玻璃和金属物品的处理。尽量使用一次性无菌塑料制品。已标明RNase-free的塑料制品，如没有开封使用过，通常不必再处理。玻璃及金属物品，使用前进行DEPC泡制处理，而后进行高压灭菌处理。6、处理存在细胞壁特别结构的酵母和一些细菌时，可以在加入Trizol试剂的同时加入无RNase的玻璃珠并剧烈振荡，使细胞裂解充分。7、由于RNase无处不在，导致RNA降解，因此可以根据后续实验设计，进行RNA处理，一般RNA提取后随即进行反转录反应。