2023-02-14
行业热点RNA提取步骤如下：
1、准备10ml离心管，121℃灭菌20min，烘箱烘干5h，将管道烘干备用；
2、将研钵、研棒、勺子用锡纸包好，200℃烘箱烘干4-6小时，取出烘干的研钵等冷却；
3、将CTAB提取液放入65℃水浴锅中加热开水浴锅65℃；
4、取出10ml离心管，每管加入4mlCTAB溶液，加入80微升基乙醇(2%)，编号，每个样品两管提取液；
5、将样品加热到65℃，取出研钵开始准备磨样；
6、磨好的样品每管加1g左右，在漩涡仪上混合均匀(可长一点)；
7、一组样品磨好后，再漩涡一次，将5分钟放入65℃水浴锅中。;
8、每管加4ml氯仿：异戊醇（v:v=24:1)在漩涡仪上混合均匀；
9、15℃，10000rpm，10min；
10、将上清液吸入新管中，加入4ml氯仿/异戊醇，在漩涡仪上混合均匀；
11、15℃，10000rpm，10min；
12、吸上清液(尽量不吸多，保证RNA质量)，两管合一管；
13、加1/5体积的12M氯化锂；1/4体积的10M氯化锂。
14、放置4℃冰箱过夜，>12小时
15、第二天，开离心机预冷4℃，开65℃水浴锅，加热SSTE65℃；
16、4℃，10000rpm，30min；
17、将上清液倒掉，轻轻吸出残留的上清液，加入400微升的SSTE；
18、在1.5ml离心管中反复吸气，将液体吸出；
19、在旋涡仪上加入400微升氯仿/异戊醇；
20、10000rpm，5min；(4℃)
21、将上清液吸出，加入新的1.5ml离心管，加入2倍-20℃放置的无水乙醇；
22、上下颠倒混合均匀，-70℃放置30分钟；打开4℃预冷的小离心机，到电泳室做胶；
23、取出-70℃样品；
24、4℃，10000rpm，20min；
25、将上清液倒掉，在离心机中甩掉；
26、吸出残留液体；
27、将沉淀物放在通风柜上晾干；
28、打开紫外线分光光度计，调整到RNA测试方法；
29、DEPC水溶解沉淀，每管加15-20微升，开始准备电泳检测和分光光度计检测；
30、电泳检测：4微升DEPC水+1微升6微升×LoadingBuffer+1微升样品；
31、光度计检测：69微升DEPC水+1微升样品；
32、A260/A280=1.8-2.0
33、电泳结果为两条带：亮度为上条：下条=2条：1
34、搅拌制作注意事项固定液可以使蛋白质变性，不再扩散，所以一定要多换一次；电泳后一定要小心取胶、固定、染色，直到干胶板，防止胶水损坏。
