友康生物
2024-09-30
公司热点间充质干细胞是一类具有自我更新和多向分化能力的多能干细胞，干细胞的质量检验环节是保障干细胞质量的关键，出现任何微小的偏差均可能对临床研究的结果造成巨大影响，因此必须有严格的标准操作程序并按其执行，以确保干细胞制剂的质量可控性以及治疗的安全性和有效性。
根据我国《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）》，细胞鉴别是干细胞质量检验多个项目中必不可少的环节之一。本期文章我们将通过使用友康GMP级间充质干细胞无血清培养基（货号：NC0106+NC0106.S）培养出的MSC，来谈谈间充质干细胞最常用的三个鉴定方法。
2006年，国际细胞治疗协会明确提出间充质干细胞的定义，也是最低的鉴定标准，即同时满足：①贴壁生长；②特异性表面抗原表达（细胞表型）：细胞表面表达CD105、CD73和CD90（≥95%，流式仪检测），不表达CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79α或CD19、HLA-DR（≤2%，流式仪检测）；③三系分化能力：能分化为成骨细胞、脂肪细胞、成软骨细胞。 一、形态学鉴定 ▼形态学鉴定 在标准培养条件下，间充质干细胞具备对塑料底物的贴附性。形态正常的MSC应呈现标准且立体的梭形，按照有序如指纹状的方向做细胞分裂，没有明显细胞空洞或分叉以及扁平化细胞。 贴壁培养是MSC的一个非常重要的特征，而且贴壁培养能很好地维持干细胞的特性。目前很多做细胞药物申报的企业为了从源头减小药物报批难度，都尽可能避免选用血清培养体系（血清体系会引入动物源成分，血清产品有批间差异，会影响最终细胞制剂的安全性、稳定性、一致性及药物审批难度），大部分均选用无血清培养体系制备细胞。 然而市面上不少无血清培养基的细胞贴壁能力不能与血清体系相比，比较依赖TC处理较好的培养瓶，细胞工厂及更大规模的培养体系更不理想，细胞会出现大量因贴壁能力缺失导致的空洞或分裂方向错乱。 友康GMP级间充质干细胞无血清培养基彻底解决以上问题，在保障细胞分裂能力的同时改善其贴壁能力，细胞形态无论在早期还是高代次均呈现颗粒分明的短梭形，在P10以上代次仅有扩增倍数的下降，但基本没有呈片状老化的细胞，同时能够适应大部分的大规模培养体系。 二、表面标志物鉴定 ▼表面标志物鉴定 根据2006年国际细胞治疗协会提出的MSC标志物鉴定标准： ≥95%细胞表达间充质细胞标志物：CD105 ,CD73, CD90等；≤2%细胞不表达血液细胞标志物：CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79α或CD19, HLA-DR等。 CD105是细胞表面I型膜糖蛋白，在细胞迁移方面发挥重要作用。CD90广泛表达于各类干细胞的表面，涉及细胞间的粘附、迁移，若细胞贴壁能力缺失或产生接触抑制，CD90会有明显下降。几种阴性标志物主要为血液类细胞的标志物，MSC不应有所表达。 通常采用流式细胞仪对MSC的细胞表型进行鉴定，友康GMP级间充质干细胞无血清培养基能够稳定维持高代次阳性标志物在98%以上。 三、三系分化鉴定 ▼三系分化鉴定 MSC的三系分化能力是指，在体外特定诱导条件下，分化为成骨细胞、脂肪细胞和成软骨细胞的能力。 能够进行三系分化诱导是MSC的基本能力，理论上不应随着细胞传代而下降。曾有数据反馈MSC在连续传代的过程中会逐渐分化为成纤维样细胞，导致其三系分化能力下降。而友康GMP级间充质干细胞无血清培养基能有效避免这一问题，在高代次下维持其三系分化能力稳定。 MSC的鉴定对于科学研究、临床应用以及推动细胞治疗和再生医学的发展具有重要意义。目前关于前两种鉴定方法（形态学鉴定和表面标志物鉴定）都已经有了非常成熟稳定的鉴定方法，而MSC的三系分化鉴定却由于培养体系、细胞来源等条件的不同，而缺乏比较成熟的三系分化鉴定试剂。友康是如何解决这些问题呢？下期文章为大家分享。
