无菌控制专题（二）|抓住细胞制品无菌控制关键点

为了有效控制微生物污染，无菌控制策略不仅仅要贯穿于细胞制品的整个生产流程，实际上这一策略实施应远早于细胞制备阶段。在细胞制备开始之前，就要考虑这三个核心点：输入材料、硬件设施、人员管理。

细胞治疗过程中的输入材料包含种子细胞的采集、细胞培养基及相关缓冲液、其它相关原材料和耗材等。输入材料可能是细胞疗法过程中引入外来污染的最高风险因素；因此，采用明确的策略来降低这些风险非常重要。

从供体或细胞库获取细胞后，对其进行分离、转导、选择和通过细胞培养扩增，以获得足够的细胞用于治疗，从培养基中收获，配制并包装成治疗剂量供受体使用。为了降低微生物污染的风险，必须选择、控制和测试细胞疗法生产的输入材料。

硬件设施是细胞制品无菌控制的基础，其设计、选型、采购及维护均应符合无菌要求。企业应该充分考虑这四个问题：①设备和设施的设计与整个环境的控制；②生产过程中水、空气和其它气体的无菌控制；③消毒和清洁设施；④环境和人员检测设备。

人员是细胞制品无菌控制中最不可控的因素，因此加强人员的管理和培训至关重要。从事细胞治疗产品生产的人员应保持良好的健康状况，定期进行体检，避免携带传染病；而且需要对操作人员进行无菌操作培训和评估，并最终由全面的无菌操作员确认。

二、污染控制的关键性指标评估

一般来说，细胞治疗产品不经过微生物去除或灭菌步骤，因此最终产品检测应评估最终产品或关键中间体是否受到污染，从而确认产品的无菌工艺和微生物安全性。这就需要企业确认以下几个关键性指标：

细菌内毒素是革兰氏阴性细菌外细胞膜的组成部分，是最常见、最有效的热原，可诱发炎症反应、发热反应或脓毒性休克等临床反应，因此需严格检测和控制。一般，可采用凝胶法、浊度法、显色试验、重组C因子方法、热原质试验、单核细胞活化测试等方法对内毒素进行检测。

通过优化生产工艺、选择低内毒素的培养基和试剂、加强生产过程的无菌控制等方式，减少内毒素的产生和污染。

细菌、真菌和支原体是细胞制品中常见的微生物污染类型，其存在会严重影响产品的安全性和有效性。

细菌真菌污染主要来自于实验室环境、实验人员操作、培养材料以及设备污染等多个方面。为了降低污染风险，需要采取一系列的无菌控制措施，包括加强实验室环境管理、规范实验人员操作、严格培养材料质量控制以及定期清洁和消毒设备或者使用一次性培养系统等。

支原体污染的主要潜在来源是用于培养的动物血清产品，尤其是开放式培养系统（FDA，2008年）。支原体污染控制机制包括选择非动物来源培养基、使用封闭式的自动化培养系统。

细胞治疗中，最关键的原材料来自动物或人类（如牛血清或猪胰蛋白酶），可能发生病毒侵入的风险。为了控制风险，应对细胞产品的供者做好传染病筛查，并且企业应从经认证的供应商处购买经认证的无病毒材料、对外来物料进行检测或在工艺过程中采取病毒灭活步骤。

事实上，还有更好的控制病毒侵入的方法。第四代培养基——化学成分完全限定的无血清培养基，与过去的血清、血替培养体系不同，因其无人源、无动物源、成分明确等特点，消除了很多致敏、致病以及未知的风险隐患，被越来越多的药企所青睐。