无菌控制专题（八）|友康细菌真菌支原体检测试剂盒产品性能

这期文章，我们就用具体的数据来说话，深入了解友康生物细菌真菌支原体检测试剂盒的产品性能到底怎么样。

细菌检测试剂盒

已验证可以检测中国药典提到的5种100 CFU/mL的验证菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌和大肠埃希菌），且与真菌、支原体无交叉反应，与293细胞DNA、NK细胞DNA和间充质干细胞DNA无交叉反应。

以铜绿假单胞菌为例，使用菌液浓度为10~0.05 CFU/mL，结果展示铜绿假单胞菌的检出限为0.5 CFU/mL。

以生孢梭菌为例，使用菌液浓度为5~0.05 CFU/mL，结果展示生孢梭菌的检出限为0.5 CFU/mL。

本检测试剂盒重复生产3个批次，检测提取后的5种100 CFU/mL的验证菌。结果见下表，可以稳定检出100 CFU/mL的5种验证菌，且3个批次的结果一致，试剂盒重现性好，CV<10%。

将内部对照质粒与不同培养基用友康磁珠提取试剂盒提取后，经真菌qPCR体系检测，内参HEX通道的检出Ct值29~31浮动，阳性FAM通道除阳性对照外均无检出。

按照药典要求分别制备10、50 CFU/mL浓度的白色念珠菌和黑曲霉。使用不同批次友康磁珠提取试剂盒提取，不同批次真菌qPCR体系检测，均可稳定检测2种浓度的2种真菌。两种真菌的检出限都是50 CFU/mL。

在3次不同的时间由不同的人员分别配置体系检测相应浓度的真菌，结果可以稳定检出50 CFU/mL浓度的白色念珠菌和黑曲霉。

验证结果显示，与支原体进化树上相近的物种（如丙酮丁醇梭菌、嗜酸乳杆菌和肺炎链球菌）无交叉反应，与其他常见细菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、大肠埃希菌）、真菌（白色念珠菌、黑曲霉）以及细胞DNA（NK细胞、293细胞以及干细胞的DNA）均无交叉反应。

采购欧盟药典推荐的三个近亲属菌株的定值菌液，原始浓度为10⁹ CFU/mL，用DMEM培养基稀释至10⁴~10²CFU/mL后，用本公司磁珠法核酸提取试剂盒提取后验证。

参照中国药典2020版，采购相应支原体培养基对口腔支原体（ATCC23714）进行培养。培养物稀释至10^-3、10^-4、10^-5三个稀释倍数，置于37℃培养28天，结果10^-5稀释倍数的三管为阴性（没有变色），其它全部为阳性，培养法的灵敏度达到10^-4，符合中国药典要求。

不同浓度样本经提取后，使用试剂盒检测可以稳定检出10^-5倍数稀释的样本，灵敏度提高了10倍。

使用相同批次的支原体检测试剂盒，分为三组在三种不同环境下，对相同的样本进行提取验证，结果一致性好。