友康生物
2026-06-05
公司热点一个反直觉的实验观察
在单个核细胞分离后的实际工作中，有时会遇到这样的困扰：Ficoll分离完成后，白膜层中仍然残留较多红细胞。如果此时直接将这个样本用于NK扩增等下游培养，效果往往不理想——红细胞的裂解产物会抑制免疫细胞的活化和增殖。
然而，我们在实验中发现了一个值得关注的现象：红细胞污染较重的脐血单个核细胞样本，经过冻存、复苏、清洗之后再进行NK扩增，其扩增效果竟然优于同一份样本的新鲜直接培养组。
这一现象看似反直觉，但其背后其实有客观的机制可循。
冻存+清洗：一个客观存在的“筛选”机会
任何冻存操作，客观上都会伴随一定的“筛选”效应。
红细胞无细胞核、代谢能力有限，对冻存损伤的耐受性远低于单个核细胞，因此在冻存过程中大部分会死亡。
部分状态不佳、膜完整性差的单个核细胞，在冻存压力下也更容易死亡。
复苏后的离心清洗步骤，会将这些死亡细胞及碎片从上清中去除。因此，“冻存+清洗”这一流程本身，确实能够让最终的细胞群体在物理上更“干净”——红细胞减少、死细胞碎片减少。
然而，这仅仅是理论上的可能性。实际效果如何，很大程度上取决于冻存液如何影响不同细胞在冻存过程中的命运。
不同冻存液，结果为何不同？
维度一：对单个核细胞的保护能力
“筛选”的前提是：健康的单个核细胞需要能够在冻存中存活下来。如果冻存液对单个核细胞的保护不足，导致大量健康细胞也在冻存中死亡，那么即使去除了红细胞和死细胞，留下的细胞数量也会严重不足，或者存活下来的细胞本身健康状态不佳，后续扩增自然难以理想。
维度二：对不同细胞类型的选择性保护
如果冻存液的配方缺乏针对性，对所有细胞提供同等程度的保护，那么可能出现两种情况：
红细胞存活率升高：复苏后仍有大量红细胞残留，这些红细胞在培养初期会裂解释放游离血红蛋白和活性氧，已被多项研究证实会抑制淋巴细胞的活化和增殖。
状态不佳的单个核细胞也可能被保留：这些细胞本应被自然淘汰，但它们存活下来后混入培养体系。由于功能缺陷，它们更易在培养中凋亡或受损，并通过旁观者效应抑制健康细胞的功能，从而拖累整体扩增效率。
因此，一款冻存液能否在“保护该保护的细胞”与“不保护不该保护的细胞”之间取得平衡，是决定污染样本冻存后下游表现的关键。
一种针对性设计的冻存液思路
基于上述分析，我们在设计冻存液时，采用了以下思路：
对健康的单个核细胞：通过复合型保护体系（含冰晶抑制剂、抗氧化组分等）提供充分保护，确保其高存活率和功能完整性。
对红细胞：不提供额外的针对性保护，使其在冻存过程中自然死亡，随后通过离心清洗去除。
对状态不佳的单个核细胞：同样不强行“续命”，让冻存压力自然淘汰它们。
这种设计并非追求“保护所有细胞”，而是希望通过冻存-复苏-清洗流程，最终获得一个红细胞残留少、亚健康细胞比例低、健康单个核细胞富集的细胞群体。
数据对比：这种思路的效果如何？
使用同一份红细胞污染较重的脐血单个核细胞样本，分别进行直接培养（新鲜）、竞品冻存液（品牌A）处理后培养、本公司冻存液（友康）处理后培养，NK扩增20天的结果如下：
本冻存液处理后的样本在NK扩增密度、纯度和总细胞数上均表现优异，相比新鲜组，NK总细胞数提升了32%。
场景说明
本文所讨论的现象并不适用于所有场景，并非鼓励为了追求筛选效果而主动冻存。对于Ficoll分离后红细胞残留较多的样本，直接新鲜培养效果可能不理想。此时，使用针对性设计的冻存液进行冻存-复苏-清洗，可能通过上述机制使后续NK扩增效果优于新鲜直接培养。
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